INDOOR Biotechnologies Inc.(INDOOR)公司是一家专业开发生产用于研究哮喘以及其他过敏性疾病的免疫诊断和相关生物学检测产品的生物技术公司。公司在过敏原环境暴露水平的评估方面为世界领先。对过敏原结构，分子生物学和免疫反应的研究，公司处于世界前列。INDOOR公司致力于环境科学，过敏和哮喘相关的专业产品与服务，以供研究人员和消费者使用，通过研究、培训和开发尖端科技，为我们的客户和全球客户服务，以改善病人护理。INDOOR为政府及学术研究人员，全球500强的企业，室内空气质量的企业、过敏疫苗生产商和生物制药企业提供服务。
INDOOR生产的一系列过敏原研究和检测用抗体拥有来自美国弗吉尼亚大学的独家专利，覆盖范围广，包括屋尘螨、猫、狗、蟑螂、真菌和食物过敏原。这些抗体是包括ELISA和MARIA™ 技术在内的过敏原检测和我们的Ventia™ 快速过敏原检测实验分析平台的核心组分。IB的过敏原检测范围非常广泛，可用于对过敏原环境暴露水平的评估，也能让用户对使用的过敏原隔离清除程序、相关产品和设备的有效性进行可靠的评估，还可应用于过敏原标准化以及相关产品的研究开发。
INDOOR 还开发出了天然和重组的过敏原产品线，可用于研究和开发过敏原诊断产品和疫苗。这个产品线目前涵盖50多种纯化的过敏原，具有很高纯度和生物活性。这个产品线还包括低内毒素的纯化LoTox™过敏原，可用于过敏原和哮喘的免疫研究。
INDOOR的技术和产品已经在全球范围内被广泛使用，相关的科学论文已在超过250种科学出版物上发表。除提供产品以外IB还提供过敏原分析服务、合同研究服务以及专业培训服务。
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Indoor尘螨 Der p 1 ELISA kit (EL-DP1) House Dust Mite 试剂盒使用说明：
1、使用聚苯乙烯微孔板，(NUNC Maxisorp Cert. NUNC 货号 # 439454),用 100ul 5H8单抗溶液 包被板子4°C孵育，过夜
单抗溶液配制： 产品中所提供的5H8单抗溶液按照1:1000的比例配制，10ul标准液中加入稀释液配制成10ml
稀释液：pH 9.6的碳酸盐缓冲液。
2、用PBS-0.05% Tween 20, pH 7.4 (PBS-T)缓冲液冲洗板子三次;每个孔里加入100ul 1%的 BSA, PBS-T，室温下孵育30min;用PBS-0.05% Tween 20, pH 7.4 (PBS-T)缓冲液冲洗板子三次
3、绘制标准曲线：
*浓度范围 250-0.5ng/ml，浓度梯度 浓度依次减半
*配制方法 取20ul抗原标准物加入ELISA板子的 A1 、B1孔中，向其中加入180ul 1% BSA, PBS-T。混合均匀后，从A1 B1 孔中取100ul加入A2、B2 孔中，再向A2、B2 孔中加入100ul 1% BSA, PBS-T，以此类推，再稀释10次，A10、B10的浓度为 0.2ng/ml。到A11 、B11和A12, B12的时候，只有稀释液，浓度为0.
4、加入100ul稀释好的抗原样本，室温下孵育1h。der p 1 屋尘螨提取物通常是第一组1/10-1/80的倍数稀释，之后不断的减半稀释。其他的样本类型，像是空气过滤器提取物和过敏原提取物，可能需要不同的稀释倍数。
5、用PBS-T 洗板3次，然后加入100ul已稀释好的生物素化的Der p 1单抗4C1.抗体溶液中含有50%的甘油，需要在1%的 BSA, PBS-T中稀释1000倍。室温下孵育1h。
6、用PBS-T洗板三次，然后加入 100ul稀释好的青霉素-链霉素双抗（Sigma S5512, 在1mL蒸馏水中重组）。将制备好的双抗用1% BSA, PBS-T稀释1000倍。室温下孵育30min。
7、洗板3次；
配制分析液：在浓度为70mM、pH 4.2的柠檬酸盐磷酸盐缓冲液中加入100μl L浓度1mM的ABTS，然后加入H2O2，稀释倍数为1/1000。
8、OD 值到2.0-2.4的时候，开始读板。
更多问题可参考如下解答：
Q1 Der p 1 ELISA 试剂盒 EL-DP1和EL-DP1A的区别是什么?
A INDOOR 推出的两个检测Der p 1 的ELISA试剂盒，实验中与之结合的单抗是不同的。
EL-DP1:捕获单抗为5H8 ，生物素标记的单抗为4C1
EL-DP1A: 捕获单抗为10B9，生物素标记的单抗为5H8
最广泛使用的ELISA试剂盒为EL-DP1 (5H8/4C1)生物素4C1单抗在Der f 1 ELISA (EL-DF1)试剂盒中也有使用. EL-DP1推荐用于大多数常规灰尘和空气样本检测Der p 1。然而在EL-DP1实验中一定程度上存在与Der f 1的交叉反应，约为2% (参见 Luczynska et al, J Immunol Meth, 1989)。在常规分析中，这种水平的交叉反应不显著。
EL-DP1A试剂盒与Der f1的交叉反应<0.1% ，可应用于区分Der p 1 和Der f 1。举例来说，过敏原生产商用于确定他们灰尘螨培养的样本没有交叉污染。EL-DP1A分析与EL-DP1试剂盒的敏感性水平相同(1-2ng/ml)。
Q2我们注意到实验显影非常慢(并且从未打到过 OD 2.0). 这有问题吗？
A 您的结果明显存在问题。控制曲线在最高浓度的读值应在OD 2.0-2.4 ，敏感度应下至1-4ng/ml。如果您所有的实验，OD值都没有达到2.0 ，那么您实验的底物和显色方面可能存在问题。
A 在储存中所有生物素化的试剂是不是一直处于冷冻状态？这会减小这些单抗的敏感性
A 您是否混用了试剂或使用缓冲液片剂？我们发现一些缓冲液片剂不如新鲜制备的溶液有用。所有溶液通常在4℃保存不超过1个月，并不使用硫柳汞。
A 是否有试剂使用过过氧化物酶的抑制剂钠作为防腐？这会阻止显色。
A 在为ABTS配置溶液B时，使用的磷酸钠形式是否正确？磷酸钠必须是二元的，即Na2HPO4•7H20
A ABST溶液中是否加了足量的过氧化氢？每毫升ABST溶液中要加入1µl 30% H2O2。
A链霉菌抗生物素蛋白-素过氧化物酶是否被正确稀释了？
A柠檬酸盐缓冲液的pH值是否正确? ABTS溶液的pH值应为4.2，并在调节前就应靠近这个pH。如果偏离较远，溶液A或溶液B或他们的组成就可能是错的。
A 洗板机污染有时可能会妨碍显色，导致显色非常缓慢，或达不到OD 2.0.洗板机应当定期清洁。
A直接通过窗户外的日光曝光会导致上述问题，孵育时让板子远离窗户。
Q3 我们实验的背景值很高，这是什么原因引起的?
A 通常当二抗是兔的多克隆抗体时，实验的背景较高。背景值通常在0.15OD左右。其他引起高背景的原因可能是：
A过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体的来源问题。我们使用的为Biosource International和Jackson实验室产品。这两个抗体的实验背景都非常低，BioSource电话为: 1-800-242-0607 (货号 # ALI4404) Jackson实验室电话为: 1-800-367-5296 (货号 # 111-036-045)。
A ABST底物在4°C能保持多久? 在冰箱中通常一个月内可以保持稳定。如果保存更长的时间试剂可能会变绿，并且出现高背景。ABST溶液在实验中应该差不多是无色的。其他溶液也应如此。所有溶液在4°C保存时间通常不超过1个月，并不含硫柳汞。
A 在加入过敏原溶液之前用1%BSA/PBS-T封闭板子30分钟。
A在某些情况下，出现高背景或在系列稀释时，最初的几个样本稀释得太低或检测不到，却出现随机样本检测值高，可能是由于洗板机的污染。洗板机应当定期清洗预防一些随即孔污染和堵塞。
A 如果手动洗板，实验时增加清洗的次数会有助于降低背景。将各孔完全填满不要溢出，然后小心的将板倾倒不要污染。然后在纸巾上温和的轻敲以去除剩余缓冲液。
Q4 我们重复的标准曲线和/或样品测试结果有很高的CV值，这是什么原因?
A 加入ABST后，读数确认显色值之前，要自始至终时常通过轻打板子两侧来温和摇晃。
A在进行ELISA实验室洗液是非常重要的。确认移液器特别是多孔道的在整块板倍比稀释时每个孔吸取和排出的量都一样。并且确认在移液时没有气泡。
Q5 我们可以保存微孔中包被的抗体吗？他们能被保存多久，我们应该怎样保存？
A包被过的板子只能保存很短的一段时间，如一个周末，或长至1周。我们通常将用抗体溶液包被的板子用塑料薄膜抱住放入实验室冰箱中或冷室中。我们未尝试过更长的保存时间。
Q6 我们可以用OPD货TMB来代替ABST吗，按照Sigma的要求（放在干燥器中，含氩）保存ABST有些困难。
A 您可以用OPD或TMB。我们不将ABST保存在氩中（这个不是很必要），同样得到了好的结果。
Q7 灰尘样本应该保存在 4°C吗，或是要冷冻？
A 实验前我们通常将房屋灰尘样本保存在4°C，但提取过后剩余的产品应保存在-20°C。
Q8 ELISA孵育的温度是多少?
A用捕获抗体包被ELISA板的温度为4°C过夜.其他所有步骤都在室温下进行，通常为20-25°C。
Q9 一个ELISA试剂盒可以分析多少灰尘或空气样本？你们推荐分享多少？
A Indoor的ELISA试剂盒对10份或20份的96孔板来说包含足够的试剂(捕获mAb, 生物素化的检测mAb，的过敏原标准品)，每块板子可以分析的样品数量取决于每个样本的稀释数量
A 重复的标准曲线需要4个对照孔(PBS-T)，占用24个孔，每个板剩余的72个孔检测样本。一般每个灰尘样本我们倍比稀释4个（螨过敏原1/10, 1/20, 1/40, 1/80），这意味着每块板可以检测18个样本。在这样的条件下一个20块板的ELISA试剂盒可以分析18 x 20 = 360个样本。
每个样本我们稀释四种，这样在大多数情况下，在一个单一实验中我们可以达到就>90%的检测结果。四个稀释度会增加每个样本控制曲线线性部分至少有两个点的可能性。，果样本已知过敏原水平范围，也可以用较少的稀释梯度。其他样本，如过敏原提取物，可能含有非常高的过敏原水平，那么在倍比稀释时，需要增加稀释的倍数，从1/100 或 1/1000开始,并可能需要在整个ELISA板上作梯度稀释。
空气样本通常过敏原水平较低，实验时可以以1/2, 1/4, 1/8, 和1/16来稀释。
Q10 为什么没有单独检测Der p 2的ELISA试剂盒呢？
A由于Der p 2和Der f 2为相同抗原表位，所以使用的检测抗体无法区分这两种物质。我们有试剂盒EL-D2就是检测Der p 2和Der f 2过敏原的
Indoor尘螨 Der p 1 ELISA kit (EL-DP1) House Dust Mite试剂盒使用说明~
Indoor尘螨 Der p 1 ELISA kit (EL-DP1) House Dust Mite试剂盒使用说明~
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