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BSA制备技术介绍

发布时间: 2018/5/21 11:20:02 浏览次数: 6272 次

牛血清白蛋白(BSA),是血清中的一种球蛋白,包含583氨基酸残基,分子量66.446kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,如在免疫分析实验中作为封闭剂和作为抗体保护剂。

BSA的制备方法主要有以下几类:

 

1、冷乙醇方法:

 

1940年由哈附大学的Cohn的发明的多步蒸馏法,血清蛋白可以根据控制不同的温度和不同的乙醇浓度进行分离。他利用温度和浓度的这种不同来把血清分离成五种组分,第五部分含有最多的白蛋白,所以叫做第五组分。冷乙醇法由于加入了有机溶剂,需要在温度极低的情况下在血液中加入乙醇直到白蛋白析出,会有残留溶剂造成BSA 纯度不高。现代工艺对Cohn冷乙醇法进行了不断的改进。

 

2、热休克法

 

heat-shock热激包含控制温度和过滤来分离白蛋白。现在倾向于在几个关键步骤用热代替有机溶剂,因为乙醇有易挥发和危险性。热休克法生产的BSA产量高,纯度也高,逐渐取代Cohn法成为BSA分馏主要方法,但是热休克法BSA也有一些缺陷:BSA蛋白高温变性,活性低。

 

3、色谱层析法(chromatographic)法

 

色谱层析是目前BSA生产最为先进的方法,也是最为温和的方法;主要包括三个步骤,超滤,离子交换色谱层析和硫酸铵沉淀;整个过程,无加热,无乙醇,无辛酸,最大程度保护BSA自然结构和功能,纯度高,最适合细胞培养。但与其他方法比成本较高。

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